冷冻电镜(cryo-EM)供给了一种有用的办法来研讨生物大分子的结构。直接电子检测和先进算法的技能打破使cryo-EM能够以挨近原子的分辨率制作生物大分子的准确结构细节。跟着cryo-EM的扩展,许多研讨人员的一起观点是cryo-EM的瓶颈在于样品制备。Cryo-EM要求将蛋白质颗粒悬浮在薄薄的玻璃化冰中以防止变性。
为了完成这一点,无定形碳膜和多孔碳网格已被广泛运用。碳膜(一般为20nm厚)不可防止地会引进电子散射,这会增加噪声并下降图画分辨率。因而,有孔的碳网格(可在孔区域中构成溶液层)已被认为是用于高分辨率单粒子剖析的首选冷冻电磁网格。可是,其并不适用于一切蛋白质。
虽然有些蛋白质更喜爱附着在碳膜上而无法进入孔中,但另一些蛋白质却以折衷的办法停留在空气-水界面上。别的,冰厚度的不均匀性使得难以在整个网格上查找薄冰区域,其间图画对比度关于高分辨率图画处理是最佳的。因为淡薄的冰块和高蛋白密度是蛋白质结构高分辨率重建的要害,因而能处理这样一些问题将使cryo-EM获益。
2019年12月26日,普林斯顿大学颜宁团队在美国科学院院刊PNAS上宣布题为:High-yield monolayer graphene grids for near-atomic resolutioncryoelectron microscopy的研讨论文。
该论文开发了一种更便利,本钱更低的办法来制作高质量的石墨烯冷冻EM网格用于单颗粒冷冻EM剖析。
研讨团队经过运用有机分子辅佐搬运办法将接连的单层石墨烯从其原始基板铜箔搬运到多孔碳栅格上来制作石墨烯冷冻EM栅格。在搬运进程中,经过运用一层薄的甲基丙烯酸甲酯(MMA)支撑石墨烯,该办法能够使悬浮的石墨烯十分高地掩盖孔区域。
来自不同区域的统计数据标明,悬浮的单层石墨烯的均匀产率约为99%,高于任何从前报导的功能性石墨烯冷冻EM网格。运用这种办法取得的高石墨烯产值在批次之间是共同的。此外,清洁工艺足以去除大多数有机分子残留物并取得清洁的石墨烯外表。整个制作进程大约需求几个小时,而且能够批量生产多达数百个网格,而无需特别的设备或很多的试剂。
冷冻电镜(cryo-EM)代表了生物大分子结构测定的前沿技能。但是,与低温样品制备相关的技能应战约束了cryo-EM无法完成更广泛的方针物的更高别离度。
该研讨证明了高产值的单层石墨烯支撑膜改进了低温样品的质量。到现在为止,运用这种办法,现已经过cryo-EM和最少的数据集完成了最小蛋白质的最高分辨率结构。该技能为更挨近原子分辨率的cryo-EM的更通用的冷冻样品制备铺平了路途。
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本文来历:iNature
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